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新一代細(xì)胞增殖追蹤技術(shù)問世,新生牛血清助力科研

更新時間:2023-06-11  |  點擊率:584

隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展,細(xì)胞增殖過程的奧秘被逐步揭開。而牛血清制備技術(shù)的不斷革新,也在一定程度上助力細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展。新生牛血清是一類比較常見的牛血清,營養(yǎng)成分的豐富度雖不及胎牛血清,但優(yōu)質(zhì)的新生牛血清,仍然足以供給大部分細(xì)胞的生長繁殖。Ausbian進口新生牛血清,富含各類營養(yǎng)成分,內(nèi)毒素含量低。

 

測量體內(nèi)細(xì)胞增殖對我們理解器官發(fā)育、疾病和組織再生具有重要意義。揭示不同細(xì)胞類型的增殖動力學(xué)對于尋找新的疾病治療方法和提供組織再生的新視角也十分重要。檢測細(xì)胞增殖的成熟方法包括對組織切片上的增殖標(biāo)記物進行免疫染色,在新合成的DNA中加入DNA類似物,以及在細(xì)胞周期中通過合成代謝檢測合并的同位素。

 

然而,目前追蹤細(xì)胞增殖的方法的局限性在不同的生命科學(xué)領(lǐng)域留下了許多未解決的問題。

 

首先,增殖標(biāo)記物的免疫染色只能提供細(xì)胞增殖的快照,使得檢測罕見的增殖細(xì)胞在技術(shù)上具有挑戰(zhàn)性。其次,目前的檢測方法不能提供直接的細(xì)胞類型特異性增殖信息。這是一個重要的問題,特別是對于那些只有較差染色譜系標(biāo)記與增殖標(biāo)記共同免疫染色的細(xì)胞類型。它對于被其他更頻繁分裂的細(xì)胞包圍的很少增殖的細(xì)胞類型也很重要,其中需要譜系信息來增加信號與背景比。

 

另外,可以評估純化后細(xì)胞增殖的方法(例如FACS)將能夠研究細(xì)胞類型特異性更新,盡管它們失去了原位增殖信息。生命科學(xué)中的許多爭議可以通過建立新的增殖檢測方法來解決,包括肝穩(wěn)態(tài)和肝損傷后的肝細(xì)胞再生。

 

譜系追蹤可用于測量活體細(xì)胞的增殖,并且根據(jù)報告小鼠系的選擇,它可以用細(xì)胞質(zhì)或核信號標(biāo)記細(xì)胞。在體內(nèi)追蹤細(xì)胞命運廣泛使用的技術(shù)是cre - loxp介導(dǎo)的遺傳譜系追蹤。在這種方法中,Cre重組酶由特定基因的表達調(diào)控元件驅(qū)動,去除報告基因等位基因中loxp -側(cè)翼的轉(zhuǎn)錄停止盒,從而產(chǎn)生報告基因的表達(例如GFPtdTomato)。人雌激素受體可以與Cre重組酶融合,使Cre活性被他莫昔芬誘導(dǎo)。Ki67的啟動子(一種廣泛使用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物)已被用來驅(qū)動CreER在他莫昔芬給藥后追蹤Ki67+心肌細(xì)胞。然而,Ki67-IRES-CreER捕獲的增殖心肌細(xì)胞百分比遠(yuǎn)低于同種型合并捕獲的心肌細(xì)胞百分比。這可能是因為他莫昔芬誘導(dǎo)的Cre活性只能持續(xù)12-24小時,因為他莫昔芬的血清半衰期。此外,當(dāng)他莫昔芬治療與Ki67啟動子活性不同步時,Ki67- ires - creer無法捕獲增殖信號。因此,隨著時間的推移,無縫捕獲Ki67+細(xì)胞是一項技術(shù)挑戰(zhàn),因為連續(xù)重復(fù)的他莫昔芬治療既麻煩又有害。

 

近日,研究人員開發(fā)了了一種檢測細(xì)胞增殖的遺傳方法:使用遺傳譜系追蹤技術(shù)以組織特異性的方式實現(xiàn)體內(nèi)細(xì)胞增殖的無縫記錄。該研究提供了一個詳細(xì)的方案(小鼠系的產(chǎn)生,小鼠系的表征,小鼠系雜交和細(xì)胞增殖追蹤),用于使用該遺傳系統(tǒng)研究細(xì)胞增殖。

 

這種細(xì)胞增殖追蹤系統(tǒng),我們稱之為“ProTracer"(增殖追蹤器),允許對活體動物中特定細(xì)胞系的細(xì)胞增殖進行終身無創(chuàng)監(jiān)測。與其他需要處死動物的短期策略相比,ProTracer不需要采樣或犧牲動物進行組織處理。為了突出這些特征,研究人員使用ProTracer研究了小鼠肝臟穩(wěn)態(tài)和組織損傷后肝細(xì)胞的增殖。技術(shù)實現(xiàn)了多個方面的突破,包括在體內(nèi)長時間不間斷地示蹤細(xì)胞增殖,實現(xiàn)了細(xì)胞類型特異性的細(xì)胞增殖檢測以及活體檢測細(xì)胞增殖等。


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