臨床醫(yī)學(xué)中的許多常見檢測手段,都源自于生物學(xué)研究。我們常見的病毒檢測,就利用了RT-PCR技術(shù)。德國Minerva Biolabs的RT-PCR引物/探針(英文名:SARS-CoV-2 Confirm),用于定性檢測和分析病毒RNA。它僅用于研究,不用于臨床診斷。
RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng),Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),用于在實驗室中檢測和擴(kuò)增RNA分子的特定序列。
RT-PCR結(jié)合了兩種基本的技術(shù):逆轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA的過程,利用一種特殊的酶稱為逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)。逆轉(zhuǎn)錄酶能夠?qū)?span>RNA作為模板,合成與其相對應(yīng)的DNA,這個DNA稱為互補(bǔ)DNA或cDNA。逆轉(zhuǎn)錄的結(jié)果是將RNA分子轉(zhuǎn)化為DNA分子,這樣就可以使用PCR技術(shù)來擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列。
在RT-PCR中,逆轉(zhuǎn)錄酶首先與RNA模板結(jié)合,利用RNA上的引物(primer)引導(dǎo)合成cDNA鏈。然后,PCR反應(yīng)的第二個階段開始,其中使用DNA聚合酶(DNA polymerase)和一對DNA引物來擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列。PCR通過多次循環(huán)的溫度變化,使DNA鏈的兩個末端的引物與DNA模板的特定區(qū)域結(jié)合,并在每個循環(huán)中合成新的DNA鏈。這樣,目標(biāo)序列就被指數(shù)級地擴(kuò)增了。
RT-PCR在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。它可以用于檢測和定量RNA分子的表達(dá)水平,例如研究特定基因的表達(dá)模式、分析病毒感染的程度等。此外,RT-PCR還常用于檢測和診斷病原體的存在,例如檢測病毒、細(xì)菌等引起感染的微生物。
在RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))中,引物(primers)是起關(guān)鍵作用的短DNA片段,用于識別和定向擴(kuò)增目標(biāo)RNA序列轉(zhuǎn)錄的互補(bǔ)DNA(cDNA)。
引物通常由兩個部分組成:前向引物(forward primer)和反向引物(reverse primer)。這兩個引物的序列是針對目標(biāo)RNA序列的互補(bǔ)序列設(shè)計的,以確保引物與目標(biāo)序列的特定區(qū)域配對。引物的設(shè)計需要考慮到幾個因素,如引物長度、堿基組成、GC含量、互補(bǔ)性等。